近期,應很多獸醫類實驗室和疾病控制類實驗室要求,由我公司為其生物安全實驗室建設提出意見和建議。結合我公司對P1、P2、P3實驗室的設計經驗,現總結干貨如下:
1 實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
1.1 試劑貯存和準備區
本區沒有嚴格壓力的要求。
1.2 標本制備區
本區的壓力相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外,為避免可能發的生氣溶膠污染,應避免在本區內不必要的走動。
1.3 擴增反應混合物配制和擴增區
本區的壓力相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
1.4 擴增產物分析區
本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
2 污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。
2.1 工作區域的嚴格劃分
(1)各個實驗區域設置合理;
(2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。
2.2 合理的系統設置
(1)合理的空調通風系統設置,盡量采用全送全排的空調系統;
(2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。
2.3 規范的操作
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;
(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;
(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
2.4 嚴格的管理
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門;
(2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;
(3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
(4)擴增產物分析區是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等;
(5)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。
2.5 完備的實驗室配套設施